生、熟小米提取物降糖效果研究(二) 物降提取物消化液为5mg/mL
1.1.1总抗氧化能力测定
将生、生熟熟小米70%乙醇粗提物、小米正己烷、提取糖效乙酸乙酯、物降正丁醇和水配制成不同的果研浓度梯度5.0,10.0,生熟15.0,小米20.0,提取糖效25.0mg/mL,物降提取物消化液为5mg/mL,果研沉淀物消化液为25mg/mL,生熟取1.0mL样品溶液加入到3.0mL工作液中(10mmol/L2,小米4,提取糖效6-三吡啶基三嗪(TPTZ)、物降20mmol/LFeCl3、果研0.3moL/L醋酸缓冲液以1∶1∶10的比例混合,预热至37℃备用),摇匀后于37℃水浴中静置10min,593nm波长处测定其吸光值。另以0.0125,0.0250,0.050,0.100,0.150,0.200,0.250和0.300mmol/LFeSO4作标准曲线(吸光度0.087~0.952),样品的抗氧化活性以达到同样吸光度值所需FeSO4的摩尔数表示。标准曲线为:y=3.0485x+0.0458,R2=0.999。1.2.5α-淀粉酶抑制作用测定10μL样品与50μL酶液混合(2U/mL),加入50μL磷酸钠缓冲溶液(0.02mol/L,pH6.9),37℃孵育10min。加入90μL可溶性淀粉溶液(0.5%),37℃反应20min。加入100μL二硝基水杨酸(DNS)溶液沸水浴10min。冷却至室温后,540nm下测定。当吸光值在0~2.22时,吸光值与葡萄糖浓度有较好的线性关系,此方法所用酶及底物浓度、反应时间产生的葡萄糖含量落在标准曲线内(y=452.64x-0.064,R2=0.992)。
1.1.2数据处理方法
采用Excel软件统计数据,所有数据均为4次重复试验的平均值和标准误。采用SPSS16.0软件进行显著性分析,P<0.05表示差异显著性。
2结果
2.1粗提取物对大鼠体重及脏器指数的影响
由表1可知,随着干预时间的延长,各组大鼠体重持续增长,但干预组与模型组体重并无差异。脏器指数能够反映药物对相关器官的影响。各组大鼠的脾、睾丸及睾丸脂肪系数与D组均无显著差异。与正常对照组(ND)相比,D组大鼠肾脏及肝脏系数均显著增加,灌胃小米提取物的大鼠肝脏系数没有明显变化(与D组相比)。Met、UM-CL组肾脏系数有所降低,但与D组相比均无显著差异。M-CL组、M-CH组大鼠肾脏系数升高,其中M-CH显著高于D组大鼠(P<0.05)。
2.2粗提物对糖耐量及空腹血糖影响
注射STZ成模后,经过为期4周的高脂喂养,D组及干预组的空腹血糖显著高于ND组(图1a),并出现了糖耐量受损(IGT),OGTT曲线下面积(AUC)增加(图1b),与ND组有极显著差异(P<0.01)。二甲双胍可显著改善由STZ联合高脂诱导的大鼠IGT及空腹血糖,AUC及空腹血糖与D组比有显著差异(P<0.05)。UM-CL可显著改善大鼠IGT及空腹血糖,其效果与二甲双胍相当,Met组及UM-CL组小鼠AUC分别降低38.97%,19.95%。而熟小米粗提取物效果较差,在低/高浓度下AUC及空腹血糖均与D组无显著差异。
2.3粗提取物对大鼠血脂的影响
由表2可知,D组大鼠血清中胆固醇(TC)及高密度脂蛋白(HDL)含量显著低于ND组大鼠(P<0.05)。经过为期4周的干预,干预组的TC、甘油三酯、低密度脂蛋白与模型组相比均无显著性差异(P>0.05)。UM组大鼠血清HDL显著高于D组(P<0.05)。
2.4生、熟小米提取物的DPPH清除能力
如图2所示。各提取物对DPPH的清除效果与样品浓度呈剂量依赖关系。各提取物的抗氧化能力存在较大差距,在样品质量浓度为8mg/mL时,生小米组UM-C、UM-HX、UM-EA、UM-BT、UM-W的DPPH清除能力分别为(73.26±0.22)%,(50.91±0.40)%,(48.14±0.74)%,(80.19±1.31)%及(69.91±0.85)%(图2a);熟小米组M-C、M-HX、M-EA、M-BT、M-W的DPPH清除能力分别为(85.14±0.43)%,(37.57±0.73)%,(74.29±0.16)%,(87.61±0.32)%,(65.61±0.5)%(图2b)。由图2a和图2b可知,各提取物的DPPH清除能力为MBT>M-C>UM-BT>M-EA>UM-C>UM-W>M-W>UM-HX>UM-EA>M-HX。可见,通过熟化处理后的M-C、M-BT的DPPH清除能力高于UM-C、UM-BT,说明熟化后小米可能具有更好的DPPH清除能力。
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相关链接:甘油三酯,二甲双胍,二硝基水杨酸,2,4,6-三吡啶基三嗪(TPTZ)
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